流式细胞术检测血小板功能及其临床应用

　　三、诊断学意义及临床应用　　利用全血法流式细胞术检测上述血小板标志物，在许多血小板相关疾病的诊断上有重要的临床应用价值。　　1.血栓性疾病：动脉粥样硬化前期血小板沉积，导致心肌梗塞和中风。抗血小板药能降低心肌缺血的发生率，证明心肌缺血与血小板活化有关。全血法流式细胞术检测表明心绞痛和心肌梗塞患者循环中有活化的血小板，血小板活力也增强。冠状窦血液的检测表明，冠状血管成形术会导致血小板活化。如果血流恢复后有高水平的活化血小板，血管可能因为内皮细胞严重损伤或血小板栓塞而发生再狭窄［12］。因此，活化血小板的检测能预测冠状血管成形术后发生急性缺血事件的危险性。　　另外，非风湿性心房纤颤患者栓塞和栓塞前期均有血小板活化［13］，胰岛素依赖性糖尿病，子痫前期，外周血管疾病等均可测出血小板活力增加和（或）循环中存在活化血小板，而早产儿的血小板对凝血酶、二磷酸腺苷（ADP）、TXA2的体外激活能力降低。　　2.血小板缺陷性疾病：全血法流式细胞术提供了一个简单、迅速的方法来诊断血小板膜糖蛋白缺陷性疾病，如巨大血小板综合征，血小板无力症等。前者是由于GPIb-IX复合物先天缺陷所致的血小板形态巨大，功能异常的出血性疾病［14］。巨大血小板从全血中分离很困难。本法能特异性地识别血小板，省去了分离巨大血小板的步骤，使检测更简便、精确。后者由于GPⅡb/Ⅲa复合物先天缺陷，导致血小板聚集功能障碍［15］。用全血法流式细胞术分析这些分子标志物有助于血小板缺陷性疾病，尤其是不典型病例的诊断。　　3.贮存池疾病：原发性贮存池疾病（δ-SPD）常规用血小板聚集法检测，但特异性和灵敏度均不理想。检测血小板致密颗粒的阿的平荧光显微镜法，主观性大，操作繁琐，而且一次检测的血小板数目有限。全血法流式细胞术为δ-SPD的诊断提供了一个简单、迅速的方法，一次能定量检测5000个以上阿的平染色的血小板。与正常人相比，δ-SPD患者阿的平染色显著下降（从49%降至15%）［11］。常在骨髓增殖异常综合征和晚期肾衰中出现的获得性致密颗粒贮存池疾病，也能用全血法流式细胞术进行检测和诊断。　　4.血小板减少性疾病：破坏过多或生成减少均能导致血小板减少。血小板相关抗体（PAIg）是反映血小板的破坏的指标，虽然其临床意义仍有争议。PAIg的检测有多种方法，但流式细胞术法有其优越性。流式细胞仪能测定单个血小板上的PAIg，只要测定104甚至103个血小板，在统计学上就能精确地得出PAIg的平均水平，因而用血量少，只要1ml血液制备的血小板就足够。流式细胞术还能同时测定其他一些反映血小板破坏的指标，如PAIgG、PAIgM、C3等。血小板的生成与巨核细胞有关，全血法流式细胞术能像检测网织红细胞那样，检测分泌到循环中的“网织”血小板，来判断血小板的生成。“网织”血小板的核酸水平，尤其是mRNA水平较普通血小板高。利用噻唑橙荧光染料可以测定出循环中“网织”血小板的百分率。检测结果的诊断价值与患者血小板数目有关。当患者血小板计数＞50000/μl，“网织”血小板可作为一个指标判断血小板减少是由破坏过多还是生成减少引起的；当计数＜50000/μl，“网织”血小板绝对水平正常或下降就不能作为血小板生成减少的可信指标，因而临床应用受到一定限制［9］。　　5.血小板储存与输注：用P-选择素（CD62）、CD63、GPⅡb/Ⅲa作分子标志物，发现血库中储存血小板有时间依赖性的活化现象［16］。储存5天以上，40%～60%血小板表达活化标志CD62。虽然其形态改变、乳酸脱氢酶泄漏以及β-TG的释放也能反映其活化，但用CD62作为储存血小板的质量控制指标最理想。活化的血小板在循环中的存活时间很短。若血小板在储存时活化了，即使输注也不能很好地提高患者止血能力。　　6.抗血栓药物的监测：尽管使用了一些抗血小板药物，如阿斯匹林、潘生丁等，但抗血栓疗效不高，也不能明显降低病人的病死率。近年来文献报道了一些新的抗血栓药，如c7E3Fab（嵌合单抗7E3的Fab片断）［17］、合成多肽、Kistrin（一种蛇毒成分）［18］等，能阻断GPⅡb/Ⅲa的功能，在抗血栓方面显示了良好的疗效。临床上已将c7E3Fab用于冠状血管成形术中，避免术后再狭窄的发生。但是，这些新药价格昂贵，并有不同程度的毒副作用。活化血小板的检测可以判断患者是否需要抗血栓药物治疗，也可以监测这些抗血栓药物的作用［8］，避免毒副反应的发生。