诊断支原体感染的六大项

时间 : 2016-04-08 11:07:21 来源：求医网

[摘要]

琼脂扩散法是诊断衣原体感染较为常用的方法之一，具体操作是将支原体接种到琼脂皿上。然后再用浸过适量血清的滤纸放到琼脂表面，观察哪...

琼脂扩散法是诊断衣原体感染较为常用的方法之一，具体操作是将支原体接种到琼脂皿上。然后再用浸过适量血清的滤纸放到琼脂表面，观察哪一种能抑制支原体生长。而通过采集标本诊断衣原体感染时，一般用泌尿生殖试子或刷片，但是该方法容易造成尿道损伤及继发感染。患者用时须慎重。

诊断支原体感染的六大项

1、解脲脲原体DNA提取：将宫颈管内或尿道内刮取物置含0.5%NP-40、0.5%Tween20，1%SDS和2mg/ml蛋白酶K的TES缓冲液(50mmol/LTris-HCl，50mmol/LNaCl，100mmol/LEDTA，pH8.0)，置37℃裂解60min，沸水5min，酚，氯仿抽提DNA乙醇沉淀，沉淀物溶于20μlTE缓冲液(100mmol/LTris-HCl，1mmol/LEDTA，pH8.0)。

2、扩增产物的检测：1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。取10ulPCR扩增物作1.5%琼脂糖凝胶电泳、0.5μg/ml溴化乙锭染色，以PGEM-3Zf(+)DNA-HaeⅢ为分子量标准，置紫外透射仪观察结果。

3、PCR扩增：传统的方法为的反应体积为100μl，含5x反应缓冲液20μl和FD-DNA聚合酶2μ、4种dNTP各200μmol/L以及引物对各25pmol/L。上述成分预先一次性分装于0.5ml离心管，-20℃备用。临用加模板DNA2μl，短暂离心，加100μl矿物油覆盖。现在试剂已商品化，反应体积为25μl，单管已分装好，只要加入模板DNA即可。置DNA扩增仪进行40次循环扩增。每次循环包括90℃变性45s(第一次循环变性2min)，55℃退火30s和72℃延伸40s(最后一次循环72℃，延伸5min)三个步骤。每次扩增均应作阴阳性对照。

4、采集标本，一般为泌尿生殖试子或刷片，少数取前列腺液，精液、关节液，或取输卵管，直肠活检物，近年来用初段尿标本离心物，以取代尿道拭子。拭子取材时，将拭子插入男性尿道2-4cm，用力擦取。该方法容易造成尿道损伤及继发感染。用时须慎重。女性则需先清洁宫颈鳞状与柱状上皮结合部，用细胞刷收集宫颈标本，能增加感染细胞的数量，较棉拭子敏感性高。

5、常用培养基为牛心浸液或蛋白胨，并含1%新鲜酵母浸液，10-20%动物血清及0.5%氯化钠，还可加葡萄糖和精氨酸以促进MH和MG生长，加入尿素以供UU代谢，适量加青霉素抑制杂菌。

6、血清学鉴定法：最常用的是琼脂扩散法，即将支原体接种到琼脂皿上。然后再用浸过适量血清的滤纸放到琼脂表面，观察哪一种能抑制支原体生长。也可用琼脂表面的菌落作荧光抗体染色法，用落射荧光显微镜观察，此法的优点是可以利用最初生长在琼脂表面上的菌落而不必将支原体传代。

温馨提示：在部分健康人群中，支原体也是可以存在的，尤其对于女性。从另一个角度来说，不是每一种支原体都会导致泌尿生殖道的感染，只有特殊的几种可以导致泌尿生殖系统的感染，大家也不必草木㫮兵，整日惶恐不安的。

【参考文献：《健康体检和常见疾病的检验结果解读》《病原生物学辅导指南》】

（责任编辑：jbwq）