时间 : 2016-05-26 14:18:36 来源:39健康网
临床工作中发现少部分经酶联免疫吸附法(ELISA)检测仅乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和抗-HBc IgG阳性的患者,病毒含量却很高。为此,采用时间分辨免疫荧光分析法(TRF)对34例此类患者进行乙型
临床工作中发现少部分经酶联免疫吸附法(ELISA)检测仅乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和抗-HBcIgG阳性的患者,病毒含量却很高。为此,采用时间分辨免疫荧光分析法(TRF)对34例此类患者进行乙型肝炎标志物(HBVM)的检查,现将结果报道如下。
一、资料与方法
1.病例选择:为2002年2月至9月住院或门诊患者,共34例,男21例,女13例,年龄5~58岁,平均(29.2±18.7)岁。采静脉血分离血清,用ELISA进行HBV标志物(HBVM)检测及HBVDNA定量检查。留取血清置-30℃保存。(1)HBsAg、抗-HBcIgG阳性,乙型肝炎e抗原(HBeAg)、抗-HBs、抗-HBe、抗-HBcIgM阴性;(2)HBVDNA含量>104拷贝/ml;(3)近3个月未使用抗病毒药物。每人进行2次抗原抗体检查,结果一致。2次HBVDNA检查,结果相差1个数量级以下。
2.常规HBVM检测:用ELISA法,试剂为上海科华生物工程股份有限公司产品,按产品说明书操作。
3.HBVDNA含量测定:采用实时荧光定量PCR法,试剂盒购自广州中山医科大学达安基因诊断中心。仪器为美国PerkinElmer公司GeneAmpE5700型PCR仪。严格按说明书操作,检测灵敏度为103拷贝/ml。
4.TRF法检查HBVM:试剂为上海新波生物技术有限公司产品,采用Anytest2000时间分辨检测仪。严格按照产品说明书操作。
5.统计分析:取HBVDNA含量的对数值进行成组设计的两样本均数比较,行t检验。
二、结果
1.HBVM:用TRF法检查发现,34例患者中HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性者15例,HBsAg、抗-HBe、抗-HBc均阳性者14例,仅HBsAg、抗-HBc阳性者5例。即用ELISA检查时HBeAg假阴性15例,抗-HBe假阴性14例(表1)。
表1时间分辨免疫荧光发析法检测乙型肝炎标志物结果(x-±s)
乙型肝炎标志物参考值样本数浓度阳性例数阳性率(%)
乙型肝炎表面抗原0~0.5ng/ml34279.19±61.6234100.0
乙型肝炎表面抗体0~10mU/ml342.21±5.6000
乙型肝炎e抗原0~0.03Ncu/ml340.15±0.131544.1
乙型肝炎e抗体0~1.5Ncu/ml342.86±1.291441.2
乙型肝炎c抗体0~0.1Ncu/ml3411.83±4.7934100.0
2.HBVDNA含量:HBeAg及抗-HBc均阴性组、HBeAg阳性组、抗-HBc阳性组HBVDNA含量的对数平均值分别为6.45±1.74、7.29±1.59、5.80±1.46。将前者与后两组分别进行成组设计的两样本均数比较的t检验,t值分别为1.005、0.816,P值均>0.05,差异无显著性。
三、讨论
HBVM的变化是评估HBV感染后病情转归的重要依据,也是抗病毒治疗的疗效考核指标之一。通过TRF检查发现,大部分ELISA法检测为HBsAg、抗-HBc阳性模式的患者其实为HBeAg假阴性(15/34,44.12%)及抗-HBe假阴性(14/34,41.18%)。仅少部分可能为病毒变异的结果。研究发现,HBsAg、抗-HBc浓度显著高于正常,ELISA及TRF符合率为100%,抗-HBs浓度明显低于正常,两者符合率为100%。而HBeAg、抗-HBe浓度仅稍高于正常,因此ELISA易出现假阴性。目前TRF主要用于激素的检测。随着仪器及试剂的国产化,检测费用的降低,TRF因其突出的高敏感性、特异性强、无放射污染等特点,在HBVM的检测中有着广泛的应用前景。
(责任编辑:jbwq)
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