胚胎的冷冻保存(1)

时间 : 2016-01-18 18:02:32 来源：安太医院

[摘要]

1983年，Trounson报道使用冷冻保存和融解的人类胚胎移植首例妊娠成功。此后冷冻保存胚胎用于辅助生育技术得以推广。1987年之前3577个胚胎用各种方法冷冻保存融解、移植，大约50%（1794个）融解后有存活力，

1983年，Trounson报道使用冷冻保存和融解的人类胚胎移植首例妊娠成功。此后冷冻保存胚胎用于辅助生育技术得以推广。1987年之前3577个胚胎用各种方法冷冻保存融解、移植，大约50%（1794个）融解后有存活力，其中1119个进行了胚胎移植。结果163例获得妊娠（13.4%），其中自然流产占26%，宫外孕4%，此外2例宫内及临产时诊断胎儿畸形。

首例活产的人类胚胎是用了不同于目前广泛使用的冷冻保存法。此例胚胎系用1.5mol/L的DMSO冷冻保存。在室温中将冷冻保存液浓度每隔10min逐步增加。在培养液（PBS）中，DMSO的初始浓度为0.25mol/L，以后则逐步增加到0.5、1.0和1.5mol/L浓度。DMSO浓度达到1.5mol/L后，培养剂中的胚胎以2℃/min的速率从室温冷却到-6℃，然后进行人工种植并在-6℃保持30min。试管再以0.3℃/min速率冷却到-80℃，然后放入液氮内（-196℃）贮存。在融解时试管中胚胎从液氮中转移到-80℃控制箱，再以8℃/min速率融解到+4℃。将DMSO逆向稀释。应用上述方法冻融处于4-细胞或8-细胞发育阶段的胚胎，则68/136胚胎存活，其半数或多一些卵裂球保持完好。68个胚胎移植到45个患者中后结果导致9例临床妊娠。

一、用DMSO冷冻保存胚胎的方法

（1）胚胎放入冷冻玻璃瓶或管子内。

（2）胚胎从+23℃开始，以2℃/min的速率冷却到-6℃。

（3）种植并在-6℃保持10min。

（4）胚胎以0.1℃/min速率冷却到-80℃。

（5）投入液氮内。

（6）在室温（+23℃）下加入DMSO，每隔10min增加浓度0.25mol/L，直到1.5mol/L。

用DMSO冷冻保存卵裂胚胎而获临床妊娠的报道发表不久，Cohen等报道应用冷冻/融解人类囊胚获得活产婴儿。该报道称体外受精获得的胚胎，受精后在人工环境内可放置4～7d。如囊胚继续发育，则将胚胎放进Earl液中，在室温下加入甘油，经过6个不同的步骤，使甘油最后的浓度达到8%～10%。然后将胚胎放进试管内，从室温开始以1℃/min速率降到-7℃，进行手工种植。此后以0.3℃/min速率将试管冷却到-36℃，然后投入液氮中。

（责任编辑：jbwq）