1株引起皮肤播散型孢子丝菌病的申克孢子丝菌临床分离株的真菌学鉴定

作者：杨鑫,李福秋,金学洙作者单位：吉林大学第二医院皮肤科，吉林长春130041

【摘要】目的：探讨一株引起皮肤播散型孢子丝菌病的申克孢子丝菌临床分离株的真菌学特点,并对其进行鉴定。方法：自1例皮肤播散型孢子丝菌病患者皮损中分离1株菌株，分别以1株固定型孢子丝菌菌株及淋巴管型孢子丝菌菌株作为阳性对照，利用常规真菌形态学方法对其进行鉴定。结果：引起皮肤播散型孢子丝菌病的临床分离株经真菌学鉴定为申克孢子丝菌。结论：引起皮肤播散型孢子丝菌临床分离株经真菌学鉴定为申克孢子丝菌，其在SDA固体培养基及小培养镜下的形态特征与其他类型孢子丝菌菌株基本一致，无法区分。

【关键词】申克孢子丝菌

　　皮肤孢子丝菌病是一种慢性肉芽肿性真菌感染，临床上有很多病原微生物可以造成孢子丝菌病样改变，如非典型分枝杆菌，其中申克孢子丝菌是造成孢子丝菌样病变的主要病原菌。申克孢子丝菌主要通过破损的皮肤或呼吸道进入机体而引起亚急性或慢性真菌感染［1，2］，如宿主存在免疫缺陷，则可能引起致命的播散型感染［3］，临床多见于淋巴管型及固定型，播散型孢子丝菌病少见。为此，我们自1例皮肤播散型孢子丝菌病患者皮损中分离1株孢子丝菌菌株，利用常规真菌学方法对其进行鉴定。

　　1病历摘要　　患者男，53岁。因颜面、躯干、四肢散在大小不等的炎性结节4月余，于2006年4月9日就诊。该患于2005年秋冬季曾接触大量芦苇、秸秆，2006年初双手背分别出现一蚕豆大小结节，不对称，较肤色略深，无痒痛感。20余天后双上肢分别出现一碗豆大小类似结节，未予系统诊治，仅外用膏剂（具体不详），后于四肢陆续出现类似结节，继而泛发至全身。自行口服“头孢类”消炎药及外用膏剂（具体药名、剂量不详）1月余，皮疹无好转，结节增大、破溃、结痂，部分有脓性分泌物。病程中无发热，为求进一步诊治于2006年4月9日来我院就诊。皮肤科查体：颜面、躯干、四肢可见数十个0.5~3.0cm大小不等的圆形或类圆形结节、脓肿、溃疡。结节呈暗红色，质通讯作者：李福秋地中等。脓肿有波动感。溃疡表面有结痂及脓性分泌物，部分结痂、渗出，中心凹陷，边缘隆起。见图1。实验室检查：血尿常规、肝肾功能、胸透均正常。真菌培养：申克孢子丝菌。组织病理检查［4］：常规切片HE染色见大量中性粒细胞、淋巴细胞及多形核巨噬细胞浸润（460×），见图2-1；真皮层内多形核细胞构成的慢性炎性肉芽肿改变，浸润细胞以中性粒细胞、淋巴细胞及多形核巨噬细胞为主（110×），见图2-2。PAS染色见紫红色雪茄样病变，周围见病变组织中大量炎性细胞浸润（460×），见图3。临床诊断为皮肤播散型孢子丝菌病。　　图1皮肤播散型孢子丝菌病资料图片　略

　　2诊断方法

　　2.1材料：来源于长春的播散型孢子丝菌菌株，来源于北京的固定型孢子丝菌菌株03331，来源于长春的固定型孢子丝菌菌株。

　　2.2方法：①将分离菌株分别接种于沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂（SDA）固体培养基，2周后观察形态。②将菌株分别进行小培养，10d后镜下观察进行菌种鉴定：用一滤纸盖住平皿底部,把一V型玻璃棒固定在滤纸上,在V型棒上放置一载玻片,高压灭菌121℃，15min。取一小块方形（1cm）灭菌的培养基置于载玻片上,在琼脂上面4个角接种真菌,将镊子用煤气喷灯火焰灭菌，用镊子取一无菌盖玻片盖在方形琼脂上面。用无菌注射器取2~3ml无菌蒸馏水注入平皿，浸湿滤纸。28℃避光培养10d。培养成熟后，先在一无菌载玻片上滴一滴棉蓝染液，取下盖玻片，迅速盖于染液上。取一无菌方盘，内置一V型玻璃棒，四角分别放置一被无菌蒸馏水浸湿的无菌棉球。将载玻片放在玻璃棒上，25℃放置24min后观察结果。　　图2-1组织病理HE染色镜下见大量炎性细胞浸润（略）

　　图2-2组织病理HE染色见慢性炎性肉芽肿样改变（略）

　　图3组织病理PAS染色见紫红色雪茄样变　略

　　图4SDA固体培养基培养结果（略）

　　3株孢子丝菌菌株基本一致：①SDA固体培养基示：1周时至直径约0.5cm菌落，呈淡褐色，表面湿润成膜状。2周时菌落直径约2cm，中央凹陷，周边隆起，出现皱褶，呈深褐色。见图4。②小培养镜检示：细长分隔菌丝，分生孢子柄多与菌丝呈直角生长，顶端着生梨形或卵圆形孢子，呈梅花瓣状分布，并见孢子沿菌丝侧生。见图5。

　　有很多病原微生物可以引起孢子丝菌病样病变，如某些细菌（结核杆菌）、真菌、利士曼原虫和非典型分枝杆菌等。但临床上孢子丝菌病主要由申克孢子丝菌引起，多见于淋巴管型及固定型，播散型孢子丝菌病少见。为此，我们自1例皮肤播散型孢子丝菌病患者皮损中分离1株菌株，分别以1株固定型孢子丝菌菌株及淋巴管型孢子丝菌菌株作为阳性对照，利用常规真菌形态学方法对其进行鉴定。　　申克孢子丝菌主要存在于土壤、木材及植物中［1~3,5，6］，在自然界呈菌丝相，体内呈酵母相。主要通过破损的皮肤或黏膜，上呼吸道或消化道进入机体而致病［7］。真菌传统的分型方法主要依赖菌体培养和镜下的形态学观察，而申克氏孢子丝菌具有“表型特征基本一致”的特点，固体培养基培养为深褐色菌落，中央凹陷，周边隆起，可伴有皱褶；镜下结构常见细长分隔菌丝，分生孢子柄顶端着生卵圆形孢子，呈梅花瓣状分布。因此常规的形态学方法可广泛用于菌种鉴定中。在实验中我们利用这一特点，以SDA固体培养基及小培养镜下观察的方法对所有菌株进行形态学鉴定，本实验报告的引起皮肤播散型孢子丝菌病的临床分离株经真菌学鉴定为申克孢子丝菌，其与皮肤固定型孢子丝菌菌株及皮肤淋巴管型孢子丝菌菌株表型基本一致，无法区分。