前言本研究主要是探讨
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在原发性胆汁性肝
硬化肝损伤中的作用,从新的角度揭示
原发性胆汁性肝硬化的病理机制。首先应用自行建立的实时荧光定量RT-PCR方法检测了原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞TRAIL基因的表达;然后分别用流式细胞术及酶联免疫吸附术检测膜型及可溶型TRAIL蛋白,分析TRAIL与反映原发性胆汁性肝硬化严重程度的γ-谷氨酰转移酶和碱性磷酸酶的相关性。接着利用体外正常人肝细胞培养,与不同浓度的TRAIL蛋白和/或胆汁作用,在不同时间点,应用MTT法观察对细胞增殖能力的影响,PI染色法检测DNA含量及细胞周期,AnnexinV/PI法检测早晚期凋亡细胞,荧光染色分析线粒体损伤,细胞免疫化学染色法检测bcl-2分子的表达情况。本研究发现原发性胆汁性肝硬化患者外周血TRAIL基因与蛋白表达均明显增高,这种异常表达与原发性胆汁性肝硬化的发生和严重程度密切相关。重组表达的人TRAIL蛋白对正常人肝细胞具有凋亡作用,且有浓度和时间依赖性;胆汁可以促进其凋亡作用。线粒体损伤及bcl-2分子表达降低可能参与TRAIL和/或胆汁诱导正常人肝细胞损伤的作用。
ThisstudywasdesignedtoexploretheroleofTNF-relatedapoptosisinducingligandinliverinjuryofprimarybiliarycirrhosis,andrevealthenewpathomechanismofPBC.BasedonTaqMan-MGBprobetechnology,real-timefluorescentquantitativeRT-PCRwassetupandusedtodetecttheTRAILmRNAlevelinperipherybloodmononuclearcells（PBMCs）fromPBCpatients.Meanwhile,theTRAILlevelonPBMCswasdeterminedbyflowcytometryandtheplasmalevelofsTRAILwasmeasuredwithELISA.Inaddition,theass...
