虎杖方剂对四氯化碳致大鼠肝损伤的保护作用研究

【摘要】目的观察虎杖方剂对四氯化碳（CCl4）致大鼠肝损伤的保护作用。方法参照文献方法制备CCl4致大鼠肝损伤模型，实验分正常对照组、药物对照组、CCl4肝损伤组、药物预防组、药物不同剂量治疗组。测定肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量，血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（AKP）活性及血清一氧化氮（NO）与肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，并进行肝组织学检查。结果CCl4致大鼠肝损伤组肝组织SOD活性明显降低，MDA含量显著升高（P<0.01）；血清ALT、AST、AKP活性及NO与TNF-α水平显著升高（P<0.01）。虎杖方剂本身对正常肝脏无损伤作用，而且虎杖方剂预防组与治疗组均能明显提高肝组织SOD活性，降低肝组织MDA含量；显著降低血清ALT，AST，AKP活性及NO与TNF-α水平（P<0.01）。肝组织学检查发现虎杖方剂能明显减轻CCl4引起的肝组织及肝细胞损伤。结论虎杖方剂本身对肝组织无明显损伤作用，通过抑制脂质过氧化、抑制TNF-α的表达和保护内皮细胞功能减轻CCl4引起的肝损伤。

【关键词】虎杖方剂四氯化碳肝损伤

肝脏是机体主要的代谢器官，病毒性肝炎、毒物、药物等诸多因素可导致肝功能受损而影响其正常的代谢功能。肝功能出现障碍时，对机体代谢产生的有害物质的清除能力下降，严重者甚至可引起肝昏迷。虎杖方剂由咸宁市南山肝病研究所历经数年收集民间治疗肝病验方、经方、单方、秘方根据中医理论由虎杖、地榆、三白草等配伍蓬莪术按一定比例成方，用于防治病毒性乙型肝炎。本方剂中虎杖、莪术均有保肝护肝作用［1，2］。近年来研究发现一氧化氮（NO）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等在肝损伤中起重要作用［3］，并且发现莪术在较大剂量时对肝有毒性作用［4］。虎杖等对肝损伤时NO和TNF-α的影响尚未见报道。为了保证临床用药的安全性和有效性，本实验就该方剂对四氯化碳致大鼠肝损伤的保护作用进行了观察。

　　1材料与方法

　　1.1动物健康Wistar大鼠，体重180～250g，雌雄兼用。

　　1.2材料原生药加蒸馏水浸泡1h后，煎煮1h和30min两次，合并煎液进行浓缩，得浓度为含生药100％的溶液，冰箱保存；四氯化碳（CCl4），分析纯，上海申鹤化学品有限公司产品，临用前用麻油配成50％的溶液；谷丙转氨酶试剂盒、谷草转氨酶试剂盒，上海生物制品研究所产品；SOD，MDA试剂盒，南京聚力生物医学工程研究所产品；NO，TNF-α试剂盒，武汉博士德有限公司产品。

　　1.3实验分组参照文献［5］方法建立大鼠肝损伤模型，60只Wistar大鼠分成6组，每组10只。正常对照组以生理盐水灌胃（1ml/kg，2次/d，连续6d）；药物对照组以药物灌胃（1ml/kg，2次/d，连续6d）；肝损伤组以50％CCl4灌胃（1ml/kg，1次/d，连续3d），第4天用生理盐水灌胃（1ml/kg，2次/d，连续6d）；药物预防组为药物灌胃（1ml/kg，2次/d，连续6d），第7天开始用50％CCl4灌胃（1ml/kg，1次/d，连续3d）；药物Ⅰ组以50%CCl4灌胃（1次/d）连续3d，第4d开始用药物灌胃（1.0g/kg，2次/d，持续6d）；药物Ⅱ组以药物灌胃2ml/kg，余同药物Ⅰ组。

　　1.4生化测定与组织学观察所有动物于末次处理后2h断头处死、取血、分离血清，按试剂盒说明用赖氏法测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）活性；用磷酸苯二钠法测定血清碱性磷酸酶（AKP）活性；用酶联吸附免疫法测定血清TNF-α水平；用硝酸还原酶法测定NO水平。同时取部分肝脏组织，用生理盐水制成10％的组织匀浆，按试剂盒说明测定SOD活性及MDA含量，另取肝组织用10％多聚甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色，在光镜下进行组织学观察。

　　2.1虎杖方剂对CCl4肝损伤大鼠血清ALT，AST，AKP活性的影响肝损伤组血清ALT，AST及AKP水平明显高于正常对照组（P<0.01），表明CCl4肝损伤模型制作成功。药物对照组与正常对照组比较，血清酶活性无显著性改变（P>0.05），提示在实验给药剂量时药物本身不引起肝脏明显损伤，对正常肝功能无明显影响。无论预防性用药还是治疗性用药，均显著降低血清ALT，AST及AKP活性（P<0.01），其中以降低AST与ALT作用更明显，结果表明药物对CCl4肝损伤大鼠肝脏有保护作用。结果见表1。

　　表1虎杖方剂对大鼠血清ALT、AST及AKP活性的影响（略）

　　与正常对照组比较，1）P<0.01；与肝损伤组比较，2）P<0.01

　　2.2虎杖方剂对大鼠肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的影响肝损伤组SOD水平显著降低，MDA水平明显升高，药物治疗组和预防组均明显降低SOD水平，降低MDA水平，提示药物能通过抑制脂质过氧化反应对肝脏产生保护作用，减轻CCl4对肝脏的损伤。结果见表2。

　　表2虎杖方剂对大鼠肝组织SOD活性及MDA含量的影响（略）

　　与正常对照组比较，1）P<0.01；与肝损伤组比较，2）P<0.01

　　2.3虎杖方剂对CCl4致肝损伤大鼠血清NO与TNF-α水平的影响与正常组比较，肝损伤组血清NO和TNF-α水平显著增高，治疗组或预防组血清NO和TNF-α水平均明显降低，表明虎杖方剂保护CCl4引起的肝损伤与抑制NO合成和分泌，以及抑制TNF-α的表达有关，结果见表3。

　　表3虎杖方剂对CCl4致肝损伤大鼠血清NO与TNF-α水平的影响（略）