【文 摘】目的：FLT3跨膜区内部串联重复突变是与
白血病发生相关的FLT3基因中最常见的突变类型。本实验旨在探讨FLT3跨膜区内部串联重复突变与
骨髓增生异常综合征预后的关系及其临床意义。方法：实验于中国刑警学院法医教研室、沈阳医学院生物化学及分子生物学教研室完成。选择199803／200510于中国医科大学及沈阳医学院附属医院血液科门诊或住院治疗的患者58例作为实验组，经免疫学、细胞遗传学和分子生物学检查确诊均为骨髓增生异常综合征患者。男37例，女21例，平均年龄19岁．均自愿参加。形态学分型中58例骨髓增生异常综合征患者中
难治性贫血13例、难治性贫血伴环状铁粒幼细胞增多4例、难治性贫血伴原始细胞增多20例、转变中的难治性贫血伴原始细胞增多12例、慢性粒一单核细胞性白血病9例。对照组为同期就诊非白血病患者及健康供者10例。①DNA提取：患者骨髓或健康志愿者外周血标本采用淋巴细胞分离液分离单核细胞，传统酚，氯仿，异丙醇法提取DNA。（2）PCR引物设计：针对FLT3基因内部重复串联结构主要发生在11号外显子，在11号外显子近端和远端分别设计引物11F和11R，扩增产物为133bp。同时设计对照组13-actin引物actinF和actinR，扩增产物为305bp。⑧PCR扩增及电泳PCR：反应体系包括上、下游引物各0．2i~mol／L，dNTPs0．25mmol／L，TaqDNA聚合酶2．5U，模板DNA200ng。反应条件为94℃变性3min后进行35个循环，最后72℃延伸10min。取扩增产物．经2％琼脂糖凝胶电泳观察结果。（少测序及Blast分析。结果：骨髓增生异常综合征患者58例和对照组10例全部进入结果分析。①58例骨髓增生异常综合征患者中19例FLT3表达阳性，阳性率为32-78％。19例FLT3基因检测阳性患者，有5例出现FLT3跨膜区内部串联重复突变，阳性率为2-74％，其中慢性粒一单核细胞性白血病2例、难治性贫血伴原始细胞过多过度型3例。②测序及Blast比对分析显示，外显子11区均有跨膜区内部串联重复突变，各例的复制区域不同，长短不等（19-39bp）。（3）临床资料显示，5例伴有FLT3跨膜区内部串联重复突变的髓增生异常综合征患者中有4例在短时期内（1～5个月）转化为急性髓系白血病。结论：髓增生异常综合征患者存在有跨膜区内部串联重复突变。该突变可以作为骨髓增生异常综合征白血病化的重要标志。
