乳胶凝集试验快速诊断轮状病毒的临床应用

作者：蒋英何春辉张海燕张韶

【关键词】乳胶凝集

关键词轮状病毒乳胶凝集腹泻胃肠炎

Theclinicalapplicationoftherapiddiagnosisofrotavirus

JiangYing，HeChunhui，ZhangHaiyan，etal.

DepartmentofClinicalLaboratory，CenterHospitalofLonggang，Shenzhen518116.

【Abstract】ObjectiveToresearchintotheclinicalapplicationoftherapiddiagnosisofRotavirus.MethodsArapiddiagnosisoffecalspecimenstakefromthe153cases1～7yearsoldchildrenwassuccessfullydeterminedbythekitforrapididentificationofRotaviruscauseofagdiarrhoeaandgastroenteristisusingtheRotaviruslatexagglutinaˉtiontest.ResultsThepositivedetectingratesofdiarrhoeaandgastroenteristispatientsbyinfectionRotaviruswere46.25%（37/80），38.36（28/73）.Totalpositiverateofthe153caseswas42.48%（65/153）.Theseresultsoftestwereobtainedwithintwominutes.Inthepositiveresults，noneofthepositivecasesshowedcrossagglutinationphenomˉena，completelyidentifiedwithclinicaldiagnosis.ConclusionTheproceduresinvolvedinthetestaresimple，thediˉagnosisinfast，andtheresultishighaccurateandspecific.Thismethodisparticularlysuitablefortheuseinruralhosˉpital.

Keywordsrotaviruslatexagglutinationdiarrhoeagastroenteristis

自从1973年轮状病毒在人体被检测出来后，它已被证明是造成婴儿与儿童腹泻性疾病的主要病因［1］。近十年来对轮状病毒的研究与流行病学的调查，已发现全世界因急性腹泻或胃肠炎而入院的婴儿与儿童病例中，有50%～60%是因此病毒感染所引起，在世界各地都有散发性的流行［2］。轮状病毒的快速检测，对轮状病毒所致腹泻或胃肠炎的患儿提供了及时准确的诊断客观依据，对帮助临床上治疗有很重要意义。我们应用了Murex公司的乳胶凝集试验（TheMurexRotavirusLatexAgglutinationTest）的快速鉴定法，对来我院就医的有腹泻或胃肠炎症状的患儿进行轮状病毒的快速诊断，获得了极为满意的结果，共检测153例患儿，总阳性率42.48%，均在2min内出结果。

1材料与方法

1.1材料（1）轮状病毒的快速诊断试剂盒:含1瓶试验乳胶悬浮液（TestLatexSuspension），1瓶质控乳胶悬浮液（ControlLatexSuspension），1瓶阳性质控抗原液（PositiveConˉtrolAntigen），1瓶抽提液（ExtractionBuffer），还有25个滴加标本和试剂反应用的纸板和小木棒，皆由法国Murex公司生产并提供。（2）检查标本:患儿的大便标本，收集患儿标本时是用清洁的塑料瓶子装盛。试验中所需标本量约1g左右。

1.2.1按Murex公司的轮状病毒乳胶凝集试验的方法进行由于试剂盒是放2～8℃保存，所以首先要把试剂盒放于室温18～25℃一段时间，约10min。取约1g患儿大便标本放于1支清洁玻璃试管内，再加入1ml抽提液，充分摇匀，静置5min，再充分摇匀，然后离心沉淀（3000转/min）10min，吸取上清液，如图1所示滴加标本与试剂。图1其中TestLatex，ControlLatex各加1滴（约40μl），标本上清液约加40μl，用试剂盒内供应的小木棒搅匀，再摇动2min，然后观察结果。

1.2.2结果判断TestLatex与上清液混匀，出现一定数量的白色小凝集块，不随摇动而散开，同时ControlLatex与上清液混匀，无白色小凝集块出现，为阳性结果。TestLatex与上清液混匀，无凝块出现，摇动时混合液像白色牛奶状均匀，ControlLatex与上清液混匀，无白色小凝集块出现，为阴性结果。若是ControlLatex与上清液混合出现白色小凝集块，而TestLatex与上清液混合无白色凝集块出现，则表示是非特异反应（Non-specificReaction）或是标本取样不正确。若是TextLatex，ControlLatex与上清液混匀均出现白色凝集，则要取标本重做，且要看:如果TestLatex与上清液混匀先出现白色凝集，而ControlLatex与上清液混匀均后出现白色凝集，则结果判断为阳性，反之，则判断为阴性。

1.2.3检测对象检测因腹泻症状来龙岗中心医院就医的患儿153例（男89例，女64例），年龄分别是1～7岁，时间是2002年9月～2003年3月。

检测共153例患儿，总阳性率为42.48%，其中轮状病毒致小儿腹泻的阳性检出率为46.25%，致小儿胃肠炎的阳性率为38.36%，均于2min内得出结果。阳性结果中无1例出现交叉凝集现象。表1为快速检测结果与临床诊断的比较。

表1153例1～7岁患儿轮状病毒快速检测结果与临床诊断比较

注:腹泻与胃肠炎的两组阳性率比较，P<0.01

引起腹泻的病原有多种，其中轮状病毒是婴幼儿急性腹泻的主要病原。轮状病毒在自然界中分布很广，会感染多种动物，感染人的轮状病毒具有共同的族抗原。轮状病毒主要是由粪-口（Fecal-Oral）的传染途径而致病，多在冬季和初春流行，此特点可与细菌性痢疾区别。病毒在肠道绒毛细胞的细胞质中增殖、破坏细胞，在脱落坏死的细胞中含有大量病毒随粪便排出。因为绒毛细胞被破坏引起腹泻，造成电解质与水分的损失，所以导致脱水、酸中毒和休克。婴幼儿感染轮状病毒若不加以及时治疗，严重的丧失电解质与体液，可能会有生命危险。因此轮状病毒及时、准确地快速检测，对临床的治疗具有重要意义［3］。

用于轮状病毒检测的实验诊断方法很多，有电镜、核酸电泳、免疫荧光、ELISA等，但这些方法尚不能快速诊断或设备昂贵、操作繁琐，很难向临床提供及时的诊断依据［4］。乳胶凝集试验检测轮状病毒是一种操作简便、快速的诊断方法，粪便中轮状病毒抗原阳性，可诊断为轮状病毒性腹泻或胃肠炎［5］。根据以上临床应用的结果来看，可知道:（1）该法检测结果准确，从阳性结果完全符合临床诊断和无1例交叉反应可说明。此外，乳胶试剂中加有非特异性凝集抑制剂，还有乳胶质控试剂，防止假阳性。乳胶质控试剂是以与抗体同一物种的非免疫动物的血清球蛋白致敏的乳胶试剂。（2）该法检测快速、操作简便、所需设备简单，而且易学易掌握。因而，它可以作为轮状病毒的常规检测方法在我国基层医疗单位推广应用。（3）值得注意的是，该法存在细菌交叉反应，患儿粪便中的肠道的病原细菌或白色念珠菌，偶然也会被试剂盒检测出，以致结果出现假阳性。这个时候要结合临床症状，做细菌培养和用ELISA方法检测轮状病毒抗体。

1Partick，Murry.MedicalMicrobiology，1994，646-648.

2詹前朕，杨宏通.微生物学（下册），台湾:华杏出版有限公司，1995，7:884-887.

3陈振阳，杨定一.最新微生物学，台湾:汇华图书出版有限公司，1996，410-412.

4李影林.中华医学检验全书，北京:人民卫生出版社，1996，1867-1870.

5陶义训，冯仁丰.实用医学检验学，上海:上海科学技术出版社，1996，872-873.