医学论文,慢性上颌窦炎窦粘膜的免疫组化研究

慢性上颌窦炎窦粘膜的免疫组化研究

临床耳鼻咽喉科杂志2000年第9期第14卷临床研究

作者：李延忠　房振胜　赵文波　邹越

单位：李延忠，现为山东医科大学卫生部耳鼻喉科重点实验室博士生；李延忠（泰山医学院附属医院耳鼻咽喉科　山东泰安，271000）；房振胜（泰山医学院附属医院耳鼻咽喉科　山东泰安，271000）；赵文波（泰山医学院附属医院耳鼻咽喉科　山东泰安，271000）；邹越（泰山医学院附属医院耳鼻咽喉科　山东泰安，271000）

　　关键词：鼻窦炎；体液免疫；细胞免疫

　　摘要　目的：探讨慢性鼻窦炎局部粘膜中免疫活性细胞和分泌免疫成分在防御炎症过程中的作用。方法：采用免疫组化染色法对两型鼻窦炎粘膜的9种免疫活性细胞和4种分泌免疫成分进行检测。结果：鼻窦炎Ⅰ型中T淋巴细胞、T4细胞亚群、B细胞、巨噬细胞明显高于正常对照组（P＜0.01）；鼻窦炎Ⅱ型中T淋巴细胞、T8细胞亚群、B细胞、肥大细胞、嗜酸性细胞明显高于正常对照组（P＜0.01）；两型中的T4/T8细胞比值有明显差异（P＜0.01）。结论：两型鼻窦炎局部粘膜某些免疫活性细胞的浸润存在一定差异，提示其发病机理及治疗方法的选择应有区别。

Immunohistochemicalstudyofthesinusmucosa

　　duringchronicmaxillarysinusitis

LIYan-zhong　FANGZhen-sheng　ZHAOWen-bo　ZHOUYue

　　（DepartmentofOtolaryngology,AffiliatedHospitalof

　　TaishanMedicalCollege,Taian271000）

　　Abstract　Objective:Tostudytheprotectiveroleofsomeimmunocompetentcellsandsomehumoralimmunefactorsinthelocalmucosaduringchronicsinusitis.Method:Usingimmunohistochemicalstreptavidin-biotinperoxidaecomplex（SABC）methodtoinvestigatethedistributionandthenumbersabouttheT-lymphocytesandsubsets,B-cells,macrophages,NKcells,mastcellseosinophils,HLA-DRantigenandIgA,IgG,complementC3,lysozymeinthelocalmucosaoftwotypechronicsinusitis.Result:ThenumbersofT-lymphocytes,Thelper/inducercells,B-cellsandmacrophagesinthemucosaofchronicsinusitistype1wassignificantlymorethantheseinthehealthycontrol（P＜0.01）.ThenumberofT-lymphocytes,Tsuppressorcells,Bcells,mastcellsandeosinophilsinthetype2wassignificantlymorethantheseinthehealthycontrol（P＜0.01）.TheratioofthehelpercellstoTsuppressorcellssignificantdifferentinthetwotypechronicsinusitis.Conclusion:Thestudyshowedthattheinfiltratingofimmunocompetentcellswasdifferentbetweenthetwotypechronicsinusitis.

　　Keywords　Sinusitis　Humoralimmunity　Cellularimmunity

　　近年来，随着鼻窦内窥镜和CT技术的发展，慢性鼻窦炎的诊治水平已提高到一个新的高度。但由于其发病的多因性，有许多因素仍未能了解，其治疗效果并不令人满意。迄今关于鼻窦粘膜局部防御系统的研究报道甚少，为此我们应用免疫组化染色对慢性上颌窦炎粘膜内的多种免疫活性细胞及体液免疫成分进行观察，报告如下。

　　1　材料与方法

　　1.1　临床资料

　　根据1997年海口慢性鼻窦炎鼻息肉临床分型分期及内窥镜鼻窦手术疗效评定标准〔1〕,随机选取1996年1月～1996年12月在我科接受内窥镜上颌窦手术的慢性鼻窦炎患者20例。Ⅰ型（2期）10

　　例，男4例，女6例，年龄15～58岁，平均31.4岁；Ⅱ型（2期）10例，男6例，女4例，年龄27～63岁，平均35.8岁。另选10例无鼻部症状，CT检查上颌窦囊肿，窦腔粘膜无增厚，鼻窦内窥镜手术时取距囊肿2cm以上或对侧壁粘膜为健康对照组，男6例，女4例，年龄24～56岁，平均37.6岁。

　　1.2　试剂

　　各种单克隆及多克隆抗体，SABC试剂盒均购于北京中山生物技术公司，IgA、HLA-DR、CD57、CD20、溶菌酶为ZYMED公司生产，CD43、OPD4、CD68、C8/144、补体C3为DAKO公司生产，IgG为VECTOR公司生产，SABC试剂盒为武汉博士德公司生产。

　　1.3　免疫组化染色

　　手术切除的标本，常规用10%甲醛固定，石蜡包埋，切片厚度5μm；采用链霉亲合素-生物素过氧化物酶复合物（SABC）法，以上各种单克隆、多克隆抗体为一抗，严格按SABC试剂盒进行操作。DAB显色，苏木素复染，每批均设严格的阳性及阴性对照。另进行常规的HE染色及甲苯胺蓝染色。

　　1.4　结果判定

　　胞浆或胞膜染为棕黄色为阳性细胞，采用双盲法在显微镜下观察并计数，免疫活性细胞每张切片观察10个高倍（×400）视野，取其均数。体液免疫成分根据粘膜表面粘液毯、腺体、杯状细胞及其它细胞的综合染色强度和比例，分为阴性（-）：无显色成分；阳性（）：胞浆呈棕黄色、有较多的显色成分；强阳性（）：胞浆呈深棕黄色，有大量的显色成分；弱阳性（+）：介于阳性与阴性之间〔2〕。

　　2　结果

　　所检上颌窦粘膜均为假复层柱状纤毛上皮，两型病变粘膜上皮有许多脱落区，大部分基底膜细胞HLA-DR抗原标记阳性。固有层中分布有小血管及混合腺，以及多种免疫活性细胞。粘膜内各种免疫活性细胞的数量见表1。

表1　3组上颌窦粘膜内的免疫活性细胞个，

　　与对照组比较，1）P＜0.01　　鼻窦炎Ⅰ型粘膜内T淋巴细胞（图1）、T4细胞亚群（图2）、B细胞、巨噬细胞均比对照组显著增多（P＜0.01）；鼻窦炎Ⅱ型粘膜内T淋巴细胞、T8细胞亚群（图3）、B细胞、肥大细胞（图4）、嗜酸性细胞的数量显著高于对照组（P＜0.01），两型鼻窦炎的T4/T8比值分别为1.89和0.92，差异有极显著性意义（P＜0.01）。

　　4种体液免疫成分在上颌窦粘膜中的表达情况见表2。

表2　3组上颌窦粘膜的体液免疫成分表达情况例

　　IgA主要分布在粘膜表面及粘膜下层散在的浆细胞内，仅有2例慢性鼻窦炎Ⅰ型表达阴性，其余均有不同程度的阳性表达，但差异无显著性；IgG主要分布在粘膜下散在的浆细胞内，各组表达程度无显著性差异；溶菌酶主要分布在粘膜下浆液性腺体（图5）及散在的巨噬细胞浆内，鼻窦炎Ⅰ型的表达明显高于正常对照组（P＜0.01），而合并息肉的鼻窦炎Ⅱ型与正常对照组无明显差异。补体C3主要表达于粘膜表面（图6），鼻窦炎Ⅱ型的表达明显高于对照组（P＜0.01）。3　讨论

　　慢性鼻窦炎的发生是多种因素作用的结果，一般认为是各种原因导致窦口鼻道复合体狭窄或阻塞以及粘膜纤毛清除功能障碍、合并病原微生物感染导致粘膜纤毛的病理性改变，造成鼻窦腔内环境异常，以上因素互相影响，使病变不断加重和迁延。正常鼻窦粘膜对病原微生物的侵袭具有一定的屏障作用，免疫活性细胞和体液免疫成分是其主要组成部分。有人认为慢性鼻窦炎反复手术治疗效果不佳，免疫功能缺陷是其中重要的影响因素〔3〕。所以检测鼻窦粘膜局部免疫活性细胞及体液免疫成分对进一步揭示鼻窦炎的发病机理，特别是广泛开展功能性鼻窦内窥镜手术后复发病因的研究具有一定价值。

　　本研究发现单纯型慢性鼻窦炎其粘膜下T淋巴细胞、T4细胞亚群、B淋巴细胞、巨噬细胞等的数量明显高于正常鼻窦粘膜。慢性鼻窦炎伴鼻息肉时其粘膜下T淋巴细胞、T8细胞亚群、B淋巴细胞、肥大细胞及嗜酸性细胞的数量明显高于正常鼻窦粘膜，说明鼻窦粘膜具有抗感染的能力。在炎症时各种免疫活性细胞明显增多，真正的细胞免疫功能低下者极少见。T淋巴细胞亚群的变化，以及肥大细胞、嗜酸性细胞在慢性鼻窦炎鼻息肉的发病中可能发挥一定的作用，这其中有感染的因素以及变态反应等因素共同作用的结果，同时也提示两种类型鼻窦炎在发病机理上存在某些差异。

　　正常鼻分泌物中含有分泌性IgA及溶菌酶等多种抗微生物体液免疫成分，一般认为体液免疫功能的缺陷在慢性鼻窦炎更容易被检出，本研究有2例单纯型鼻窦炎粘膜表面缺乏IgA表达。溶菌酶作为非特异性免疫物质在单纯型鼻窦炎粘膜下腺体中表达增强，而在合并鼻息肉时表达不增强，与国外的研究相一致〔2〕。补体是一组参与炎症及免疫反应发挥一定生物学效应的蛋白质，正常鼻粘膜、慢性鼻炎、变应性鼻炎分泌物中含有一定数量的补体〔4〕，本研究发现鼻窦炎粘膜表面补体C3表达增强，说明补体在鼻窦炎症及变态反应中发挥一定作用。

　　本研究发现单纯型慢性鼻窦炎与合并鼻息肉型之间粘膜免疫活性细胞浸润，特别是T细胞亚群以及溶菌酶分泌等方面存在差异，提示其发病机理可能不同，因此在治疗方法的选择上应有所区别，这样可以提高慢性鼻窦炎的治疗效果。

图1　慢性单纯型上颌窦炎粘膜内T淋巴细胞，免疫组化SABC染色×200

2　慢性单纯型上颌窦炎粘膜内T4细胞亚群，免疫组化SABC染色×400

3　慢性上颌窦炎伴鼻息肉粘膜内T8细胞来群，免疫组化SABC染色×400

4　慢性上颌窦炎伴鼻息肉粘膜内肥大细胞，甲苯蓝染色×400

5　慢性单纯型上颌窦炎粘膜下腺体溶菌酶表达

6　慢性上颌窦炎伴鼻息肉粘膜表面补体C3表达，免疫组化SABC染色×200

　　本课题为山东省卫生厅青年科学研究基金资助项目（编号95-16）

　　参考文献

　　1，中华医学会耳鼻咽喉科学会，中华耳鼻咽喉科杂志编辑委员会.慢性鼻窦炎鼻息肉临床分型分期及内窥镜鼻窦手术疗效评定标准.中华耳鼻咽喉科杂志，1998，33：134～134