基因重组去整合素rAdinbitor对C6神经胶质瘤细胞FAK-Ras/MAPK通路的影响

EffectsofrecombinantdisintegrinrAdinbitoronFAK-Ras/MAPKpathwayinC6gliomacells投稿时间：2008-9-27最后修改时间：2008-11-30稿件编号：20080669中文关键词：白眉蝮蛇去整合素rAdinbitorC6神经胶质瘤细胞纤连蛋白（FN）英文关键词：GloydiusblomhoffibrevicaudusdisintegrinrAdinbitorC6gliomacellFN基金项目：国家自然科学基金资助项目（30572141）作者单位赵霆大连医科大学生物化学与分子生物学教研室，大连116044李金萍大连医科大学生物化学与分子生物学教研室，大连116044胡燕荣大连医科大学生物化学与分子生物学教研室，大连116044洪　艳大连医科大学生物化学与分子生物学教研室，大连116044赵宝昌大连医科大学生物化学与分子生物学教研室，大连116044摘要点击次数：487全文下载次数：370中文摘要：rAdinbitor为大连医科大学生物化学与分子生物学教研室从旅顺产白眉蝮蛇毒腺中采用克隆技术得到的去整合素．之前研究已证明rAdinbitor具有抑制C6神经胶质瘤细胞增殖、促进C6神经胶质瘤细胞凋亡的作用．rAdinbitor对C6细胞作用的分子机制需要进一步研究．在此研究中，用E.coliBL21/pET23b-adinbitor表达rAdinbitor，通过NiSepharose6FastFlow亲和层析柱对rAdinbitor进行纯化，纯化蛋白经Westernblotting鉴定．用纤连蛋白（fibronectin，FN）诱导C6细胞．通过免疫沉淀和免疫印迹检测不同浓度的rAdinbitor对FN诱导的C6细胞中黏着斑激酶（FAK）、MEK1/2、Caspase-3的表达以及对FAK、ERK1/2活性的影响．研究表明：各实验组不同浓度的rAdinbitor均能明显降低FAK、MEK1/2的表达，对Caspase-3的表达起促进作用，并对ERK1/2的磷酸化有明显的抑制作用；除10mg/LrAdinbitor对FAK磷酸化无明显抑制作用外，其余浓度的rAdinbitor对FAK的磷酸化起了明显抑制作用．这说明rAdinbitor对FAK及其下游Ras-MAPK传导通路的抑制在其抑制C6增殖过程中起了重要作用，Caspase-3表达升高提示，rAdinbitor可能通过抑制ILK及其下游的PI-3K/Akt途径起到了促进细胞凋亡的作用.英文摘要：rAdinbitorwasclonedfromGloydiusblomhoffibrevicaudusinthelaboratory.PreviousresearcheshadprovedthatrAdinbitorcouldinhibitproliferationofC6gliomacellsaswellaspromotetheirapoptosis.ThemolecularmechanismofrAdinbitor’seffectsonC6cellsneedtobefurtherstudied.rAdinbitorwasexpressedinE.coliBL21/pET23b-adinbitorandpurifiedwithNiSepharose6FastFlow.ThepurifiedproteinwasconfirmedbyWesternblotting.C6cellswereinducedwithfibronectin（FN）.TheeffectsofrAdinbitorwithdifferentconcentrationsontheexpressionofFAK,MEK1/2andCaspase-3aswellasonactivityofFAKandERK1/2inFN-inducedC6cellswerestudiedbyimmunoblottingandimmunoprecipitation.ResultsshowedthatrAdinbitorwithdifferentconcentrationscouldobviouslyreducetheexpressionofFAKandMEK1/2,increasetheexpressionofCaspase-3,aswellasdecreaseERK1/2phosphorylation;besides10mg/LrAdinbitor,otherconcentrations’rAdinbitorcouldinhibitFAKphosphorylationobviously.Allthoseeffectsweredose-dependent.ResultsindicatethattheeffectsofrAdinbitorondecreasingexpressionandactivityofFAKandinhibitingRas-MAPKsignalingpathwayplayanimportantroleinsuppressingtheproliferationofC6.Furthermore,theincreaseinCaspase-3expressionimpliesthattheincreaseinapoptosisofC6cellsmightbeduetothesuppressionofrAdinbitorontheactivityofILKandPI-3K/Aktpathway.