应用抑制消减杂交法克隆肾细胞癌与相应正常肾上皮差异表达的基因

时间 : 2009-11-29 22:28:41 来源：cdmd.cnki.com.cn

[摘要]

肾细胞癌抑制消减杂交差异基因 CDNA文库

【摘要】：肾细胞癌恶性程度高，临床表现多样，其发病占全身恶性肿瘤的3％左右。全世界肾细胞癌的发病率每年增加2％，每年死于肾细胞癌者近100，000例。在我国，肾细胞癌的发病率占泌尿系肿瘤的第二位，近年来有逐年增加的趋势，严重的威胁了人民的健康。参与调控细胞生长、分化和死亡的基因数目庞大，要弄清其确切的发生和发展机制需要对肾细胞癌特异性表达基因进行克隆和分析，了解其基因表达谱。这对今后肾细胞癌的特异性诊断、生物治疗及预后评价有重要的意义。克隆差异表达基因的方法很多，Diatchenko建立的抑制性消减杂交技术是众多方法中优点较突出的一个。它特异性高、灵敏度高、假阳性率低、过程相对简捷。本实验应用抑制性消减杂交（SuppressionSubtractiveHybridization，SSH）技术构建了人肾细胞癌组织与相应正常肾上皮组织差异表达的cDNA消减文库，并利用斑点印记杂交（DotBlot）技术从中筛选出肾细胞癌差异表达的基因，随机选取部分阳性克隆进行测序，结果在GenBank中做同源性比对分析。天津医科大学硕士学位论文研究结果表明:应用SSH技术构建了具有较高消减效率的人肾细胞癌组织与相应正常肾上皮组织的cDNA消减文库，文库中含有400个阳性克隆，随机挑取200个克隆，进行扩增，Dotblot筛选出177个阳性克隆，对其中55个克隆中的CDNA插入片段进行测序后经GenBank检索表明共含有26种独立的基因片段，已知基因片段24种，和未知基因片段2种。本研究通过构建人肾细胞癌与正常肾上皮差异消减的cDNA文库，既获得了一些已知的肿瘤相关基因片段，验证了前人的研究成果;又获得了一些新的基因片段为进一步研究基因功能打下基础。同时也为今后肾细胞癌的特异性诊断、预后分析及生物学治疗提供了新的理论依据。人肾细胞癌消减文库的成功构建表明抑制性消减杂交技术是筛选、克隆肾细胞癌差异表达基因的有效手段，这使得进一步大批量筛选、克隆肾细胞癌特异性表达基因成为可能，为阐明肾细胞癌发生、发展的分子生物学机制提供了新的研究方法。