【摘要】：目的:为了明确糖皮质激素局部注射治疗方法的具体机理,我们前期完成的动物实验证实地塞米松对体外培养的大鼠骨骼肌成肌细胞的增殖和分化无明显的直接影响,但在成纤维细胞和成肌细胞混合培养中能够减少成纤维细胞对成肌细胞分化的抑制,间接促进成肌细胞分化。本实验是在熟悉动物成肌细胞培养、分离方法的基础上,进一步探索临床人源性正常肌肉及先天性肌性
斜颈患者病变挛缩肌肉标本成肌细胞的培养方法,为后续实验做准备。方法:第一部分,应用胰蛋白酶和胶原酶两步消化法和差速贴壁法,从出生后4-7天的大鼠四肢骨骼肌中进行原代成肌细胞和成纤维细胞的分离和培养,在倒置相差显微镜下观察他们的生长和分化特性,观察多核肌管的形成过程。第二、三部分,标本来源于临床
先天性肌性斜颈患者正常肌肉和病变挛缩肌肉,同样应用胰蛋白酶和胶原酶两步消化法和差速贴壁法,在倒置相差显微镜下观察他们的增殖和分化特性,对第二部分培养的成肌细胞应用肌动蛋白抗体进行免疫细胞学方法予以鉴定。结果:在动物实验中可观察到4-5天成肌细胞增殖融合形成多核的肌管,核位于肌管的中心,呈长轴排列成串珠样。第二部分实验,13-14天成肌细胞增殖融合形成多核的肌管,核位于肌管的中心,呈长轴排列成串珠样,免疫细胞学鉴定结果显示胞核染成棕黄色,证实为成肌细胞。第三部分实验未培养出成肌细胞。结论:在先天性肌性斜颈病人临床手术正常肌肉标本能培养出成肌细胞,而在病变挛缩的肌肉包块中应用目前的培养方法不能培养出成肌细胞。
