基质金属蛋白酶

【摘要】：腺样囊性癌是涎腺最常见的恶性肿瘤之一，以其侵袭性强，手术后易于复发及远隔转移为其临床特点。细胞外基质（ECM）是由纤维蛋白和蛋白多糖组成的复杂的三维网状结构。ECM对于许多生理过程是是必需的，如组织的发育、生长和修复。肿瘤细胞周围ECM的降解对于肿瘤细胞的侵袭和转移是必不可少的步骤之一。MMPs为锌依赖性肽链内切酶家族，包含至少18种蛋白酶，可以降解ECM中所有成分，MMP-2属于其中一种蛋白酶。研究表明MMPs不仅通过降解ECM在肿瘤侵袭过程中发挥重要作用，而且在肿瘤生长和肿瘤血管的形成中都发挥着重要的作用。MMPs的表达与恶性肿瘤的不良预后密切相关。针对MMPs的抗肿瘤治疗日益受到重视，强力霉素是一种四环素类抗生素，研究发现它可以抑制MMPs的活性，减少肿瘤的侵袭和转移。为明确MMP-2在腺样囊性癌侵袭过程中所起的作用及强力霉素对腺样囊性癌细胞增殖、MMP-2活性及侵袭行为的影响，本实验进行了以下几个方面的研究并获得相应的实验结果：一．MMP-2在腺样囊性癌和多形性腺瘤中的表达应用免疫组织化学方法，检测MMP-2在多形性腺瘤和腺样囊性癌中的表达，MMP-2表达的阳性率分别为28.6％及82.6％，二者之间存在着非常显著的差异（P＜0.01）。正常涎腺组织中MMP-2表达为阴性。弟四军语大学颀士学泣移工5实性型与小管型腺样囊性癌标本MM卜2的表达差异非常显著炉叱刀1），实性型腺样囊性癌MMP－2的表达明显增强，而筛状型分别与实性型及小管型腺样囊性癌标本MMP－2的表达无显著性差异。二、影响腺样囊性癌预后因素的分析分别对随访5年以上的刀例腺样囊性癌患者的石蜡组织块进行MMP－2。血管内皮主长因子（VEGF）以及肿瘤坏死因于口（TNFa）免疫组织化学染色并将染色结果与随访及临床资料进行分析。肿瘤复发者MMP－二表达高于肿瘤无复发者T叼刀5人Speannan相关分析表明MMP工染色强度与肿瘤复发密切相关（，0．M5尸吻．05人死亡组与未死亡组MMP工染色强度也存在明显差异（P＜0．05）。VEGF的表达在死亡组病人中增强非常明显（P＜0．01）。Spearman十关分析表明VEGF的表达与患者死亡相关（r＝0．54，P＜0．05）。未发现hFa表达与各临床病理参数的关系。三、强力霉素对腺样囊性癌细胞系SA。。83增殖及侵袭行为的影响1．形态学：倒置显微镜下观察活细胞，不同浓度的DOXy作用于SACC83细胞后，肿瘤细胞发生皱缩，由原来的多边形变为圆形，同时细胞体积也明显缩小。药物作用时间越长，浓度越高，这种改变就越明显。2．药物对细胞增殖能力的影响：DOXy对SACC83细胞增殖的抑制作用具有剂量时间依赖性。3．药物对细胞周期的影响：流式细胞仪检查加药后细胞被阻滞在G；期，S期细胞比例下降。未能观测到凋亡峰出现。4．DOXy对蛋白酶活性的影响：明胶底物SDS－PAGE凝胶电泳显示SACC83细胞可分泌MMP工和MMPg。10ug／mlDoxy作用后导致两种酶活性均减弱。5．DOXy对SACC83细胞侵袭行为的影响：加药组和对照组肿瘤细胞侵袭面积与复合体面积之比分别为0．215士0．084和0．414土0．156，H者之间差异非常显著（P＜0刀1）。6．免疫组织化学染色结果：DOXY作用后SACC83细胞MMP－二和PCNA的表达减弱。Bcl卫和整合素a；巳表达阴性。结论：＊LIP．2的表达与腺样囊性癌的恶性表型及肿瘤细胞的侵袭相关：WP－2和VEGF表达与腺样囊性癌预后相关；强力霉素对SACC83细胞的增殖具对W车逐人生胁／十丛冶／6一有抑制作用，同时也可抑制肿瘤细胞的侵袭，有望成为减少腺样囊性癌术后复发及转移的药物。