星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白表达及意义

作者：席峥　席焕久　高志安　孙梅珍　王红云

【摘要】目的研究人脑星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白的差异表达，探讨它们之间、它们与病理分级及复发之间的关系。方法应用免疫组化SP法检测了50例星形细胞瘤中不同级别的FHIT、PCNA蛋白的表达水平，以10例非肿瘤脑组织作对照。结果非肿瘤脑组织FHIT、PCNA蛋白阳性表达率分别为100%、0，星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白阳性表达率分别为40%、86%；尽管在星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白表达总体差异有显著性（P<0.05），Ⅱ级与Ⅲ级、Ⅱ级与Ⅳ级间比较差异有显著性（P<0.05），但Ⅲ级与Ⅳ级比较差异无显著性（P>0.05）；经统计学分析FHIT、PCNA蛋白呈显著负相关（P<0.01）；8例复发病例中复发前后FHIT、PCNA蛋白表达差异有显著性（P<0.05）。结论星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白表达之间的显著负相关，提示FHIT蛋白可能对细胞增殖具有负性调控作用。FHIT、PCNA蛋白的表达水平可能与星形细胞瘤的病理分级和复发有关，推测FHIT、PCNA蛋白的表达可能与星形细胞瘤的肿瘤侵袭性相关。

【关键词】星形细胞瘤;FHIT蛋白;PCNA蛋白

ExpressionandsignificanceofFHITandPCNAproteinsinastrocytoma　　【Abstract】ObjectiveTostudytheexpressionofFHITandPCNAproteinsinhumanbrainastrocytoma;ToinvestigatetherelationshipbetweentheexpressionofFHITandPCNAproteinsandpathologicalgradingandrecurrenceinastrocytoma.MethodsImmunohistochemistrystainingforFHITandPCNAproteinswereperformedin50casesofastrocytomaand10casesofnon-tumorbraintissues.ResultsThetotalpositiverateofFHITandPCNAproteinswere100%and0innon-tumorbraintissues;and40%and86%inastrocytomarespectively;ThoughtotalvarianceofFHITandPCNAproteinsexpressionamongtumorgradeswasremarkable（P<0.05）,thesignificantdifferencesstatisticallyofFHITandPCNAproteinswereobservedingradeⅡ-grade,Ⅲ;andgradeⅡ-grade,Ⅳ（P<0.05）,exceptthoseingradeⅢ-grade,Ⅳ（P>0.05）;TheexpressionofFHITandPCNAproteinsinastrocytomaweresignificantlynegativecorrelated（P<0.01）,thesignificantdifferencesstatisticallyofFHITandPCNAproteinswereobservedin8casesofrecurrence（P<0.05）.ConclusionInastrocytoma.therearesignificantlyinverserelationsbetweentheexpressionofFHITandPCNAproteins.ItissuggestedthatFHITproteinmayplayaroleinthenegativeregulationofcellproliferation.TheexpressionofFHITandPCNAproteinsinastrocytomaweresignificantlycorrelatedwithpathologicalgradingandrelapselikely.AbnormalexpressionofFHITandPCNAproteinsinastrocytomamayrelatetotumorinvasive.　　【Keywords】astrocytoma；FHITprotein；PCNAprotein

　　1996年Ohta［1］等人利用外显子捕获法（exontrapping）确定并克隆出FHIT基因。该基因定位在3号染色体短臂3p14.2区域，跨越人类染色体脆性部位FRA3B，并含有编码组氨酸三联体的功能区，故命名为脆性组氨酸三联体基因（fragilehistidinetriad,FHIT）。FHIT基因存在于大多数正常组织中，许多恶性肿瘤存在该基因异常。研究FHIT基因在各种肿瘤组织中的改变，确认其是否为抑癌基因是近年来分子肿瘤学研究的热点之一。Ji等［2］发现用FHIT的腺病毒转导的肺癌细胞系有很明显的细胞生长抑制和细胞凋亡的增加。同时，FHIT蛋白表达增加与细胞增生减少和凋亡活动增加相一致［3］。但此基因在肿瘤细胞增殖中的作用，目前国内外相关文献报道十分有限。本文研究FHIT、PCNA蛋白表达之间的关系，以及它们与星形细胞瘤各种病理级别和复发的关系，旨在探讨星形细胞瘤的FHIT蛋白的表达程度与肿瘤细胞过度增殖之间及复发的关系，为进一步了解星形细胞瘤的生物学特性，判断肿瘤的恶性程度和评估患者预后复发提供参考指标和实验依据。

1资料与方法

1.1一般资料

　　北京市神经外科研究所1998～1999年6月期间收治的随访资料完整的50例星形细胞瘤患者。Ⅱ级9例，Ⅲ级18例，Ⅳ级23例。经手术病理证实,术前均未采取放疗、化疗和免疫治疗。10例非肿瘤脑组织作为对照。标本经常规处理后5μm厚度连续切片，行HE染色和免疫组化染色。

1.2主要试剂及仪器

　　兔抗人多克隆抗体FHIT（工作液），鼠抗人单克隆抗体PCNA（PC10，工作液），SP试剂盒等均购自北京中山生物技术有限公司。其他为免疫组化常用和必备的试剂和主要仪器。　　1.3实验方法

　　常规免疫组化染色过程。细胞浆出现棕黄色颗粒为FHIT蛋白表达阳性。参照Greenspan等的半定量法对染色强度及阳性细胞百分率进行评分，评分为1～3分判为低表达（减弱或缺失），≥4分判为表达正常［4］。细胞核出现棕黄色颗粒为PCNA蛋白表达阳性（反应性星形细胞、血管周围淋巴细胞、血管内皮细胞不列入计数），用3个参数的半定量法对染色强度及阳性细胞百分率进行评分，评分＜3分为阴性，≥3分为阳性［5］。

1.4数据处理

　　采用SPSS统计软件。计数资料应用χ2检验、Fisher精确概率法、计量资料比较用LSD方差分析，相关用等级相关（Kendall和Spearman）检验。

2.1FHIT、PCNA蛋白表达与组别的关系