先天性旋毛虫病的研究

【摘要】：旋毛虫病是一种严重的人兽共患寄生虫病，主要因生食或半生食含有旋毛虫幼虫囊包的猪肉或其它动物肉类而感染。本病严重危害人体健康，若不及时诊断和治疗，患者的死亡率可高达3％～30％。控制旋毛虫病的关键措施在于预防，若能切断其传播途径，则可防止本病的发生。动物实验表明旋毛虫病还可通过粪便传播，蝇蛆也可能传播旋毛虫病。然而，关于人体旋毛虫病是否还存在有母婴垂直传播目前尚不清楚。鉴于此，本文应用旋毛虫病小鼠动物模型对先天性旋毛虫病进行了研究，并对子鼠的获得性免疫及其免疫保护作用进行了观察。方法将昆明小鼠按受孕时间的不同分为受孕后感染组和感染后受孕组，待新生子鼠出生后1天内将其杀死，剪碎后用贝氏法分离旋毛虫幼虫，观察新生子鼠是否有先天性旋毛虫感染。将正常母鼠所产子鼠出生后1天由感染旋毛虫的母鼠喂养，21天后将子鼠宰杀，通过直接镜检法及人工消化法检查旋毛虫幼虫，观察旋毛虫病是否可经乳汁传播。将感染旋毛虫的母鼠所产子鼠于出生后1个月收集血清，用间接ELISA法测定抗旋毛虫抗体IgG，并观察子鼠出生后不同时间的血清抗旋毛虫抗体水平和持续时间。将感染旋毛虫的母鼠所产子鼠于出生后40天用旋毛虫肌幼虫攻击感染，感染后1个月将子鼠杀死，人工消化法收集幼虫，计数并计算肌肉虫荷，观察从母鼠获得的抗体对子鼠的免疫保护作用。此外，收集感染旋毛虫的母鼠及其所产子鼠的血清，分别经尾静脉注射正常小鼠，攻击感染后观察被动转移血清对旋毛虫感染的抵抗作用。将未受孕的正常小鼠及受孕后不同时间的小鼠用旋毛虫攻击感染，感染后1个月杀死，计算肌肉虫荷，观察小鼠受孕后对宿主抗旋毛虫感染的免疫应答是否具有协同作用。用SPSS10.0对各组数据进行统计分析。2004届郑州大学硕士研究生论文结果1.感染旋毛虫的母鼠所产子鼠的旋毛虫感染情况:感染旋毛虫后8天和22天受孕母鼠所生子鼠中各有2只发现旋毛虫感染，感染率为20%（2/10）和25%（2/8），分别检获3条、2条、1条、1条幼虫;受孕后7天感染旋毛虫的母鼠所产子鼠中有2只感染旋毛虫，感染率为33.3%（2/6），分别检获幼虫7条和24条。2.交叉哺乳试验:3只正常雌鼠所产子鼠（9、10、n只）分别由3只刚产子鼠的感染旋毛虫的母鼠喂养，这3只母鼠曾分别在不同孕期（孕3天，孕n天，孕18天）用旋毛虫攻击感染。21天断乳后剖杀子鼠，用直接镜检法和人工消化法检查旋毛虫幼虫，结果30只子鼠均未检出旋毛虫。3.受孕后不同时间感染旋毛虫的母鼠所产子鼠的血清抗体水平:受孕后1、5、16和18天感染旋毛虫的母鼠所产子鼠出生后30禾收集血清，用间接EuSA法检测抗旋毛虫抗体水平，抗体阳性率分别为O、0、33%（3/9）及o.n%（1/9），其OD值分别为0.098士0.013、0.105士0.015、0.16狂0.085和0.12升0.038，但各组间的抗体水平无明显差异（P0.05）。4.感染旋毛虫后不同时间受孕的母鼠所产子鼠的血清抗体水平:感染旋毛虫后18、21、60天受孕的母鼠所产子鼠于出生后30天收集血清，用间接ELISA检测血清抗旋毛虫抗体，抗体阳性率分别为56%（9八6）、47%（8/17）及100%（21/21），OD值分别为0.144切.101、0.181功.074及0.411土0.070。感染旋毛虫后60天受孕的母鼠所产子鼠的血清抗旋毛虫抗体水平最高，与感染后18天及21天受孕母鼠所产子鼠相比有明显差异（P=0.000.01）。5.母源性抗体在其子鼠体内变化情况:用间接ELISA法检测感染旋毛虫后60天受孕的母鼠所产子鼠的血清特异性抗旋毛虫抗体，子鼠出生后1、24、40天血清抗体阳性率分别为100%（9/9）、78%（21/27）、17%（4/27），OD值分别为0.24社0.049、0.127士0.029、0.06妊0.023，子鼠出生后24天的血清抗体水平与出生后1天相比较差异有显著性（尸=0.口口0.01），出生后40天与24天相比较均有显著性差异（尸=口.000.01），表明子鼠的血清抗体水平随出生后的时间延长而降低。6.小鼠体内母源性抗体对旋毛虫攻击感染的保护作用:感染旋毛虫的母鼠所产的21只子鼠出生后40天用旋毛虫攻击感染（200条幼虫/只），感染后30天剖杀，结果发现子鼠的每克隔肌幼虫数（4559.235*2116.539）明显低于对照组（11992.67肚2002.179），减钻2004届郑州大学硕士研究生论文虫率为61%，与对照组相比有显著差异（尸二0.000.01），表明子鼠体内的母源性抗体对旋毛虫攻击感染具有部分免疫保护作用。7.感染旋毛虫母鼠及所产子鼠血清被动转移的抗旋毛虫作用:感染旋毛虫母鼠血清被动转移小鼠的肌幼虫荷（1749.375士625.327）与子鼠血清被动转移小鼠的肌幼虫荷（1463.875士522.059）相比无显著性差异（P0.05），但与对照组（3304.75肚837.416）比较差异均有显著性（尸二a000.01），两者的减虫率分别为52%和55%。结果表明感染旋毛虫母鼠及所产子鼠血清被动转移后对旋毛虫攻击感染具有部分保护作用。8.未孕雌鼠和孕鼠用旋毛虫攻击感染后30天肌幼虫检查结果:未孕雌鼠和孕鼠感染旋毛虫后30天的肌幼虫荷分别为3238.0肚421.624和1707.667士459.455，两者相比有显著性差异（P=0.0000.01）。提示小鼠受孕后对旋毛虫感染的免疫应答具有协同