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冷冻卵子新进展

时间 : 2009-03-27 16:27:52 来源:39健康网

[摘要]

  自1986年澳洲Dr。Chen首次报告卵子冷冻合并体外受精成功怀孕的例子后,约有十年的时间卵子冷冻并没有明显之进展。这几年来在国内外学者的努力研究下,在技术上以及学理上已有长足的进步,成功率大为提高。   目前改进存活率之方法最常是用改良式慢速法,提高蔗糖浓度及脱水平衡时间,并且解冻之步骤亦有改良。义大利Fabbri报告改良式慢速法以1。5 M 1,2-propanediol (PROH) 加0。3M蔗糖做卵子冷冻,存活率达82%,而0。2 M蔗糖 (60%)、0。1 M蔗糖 (34%)。使用改良式慢速法可增加脱水能力,减少冰晶形成,缓和解冻渗透压之变化。   成熟卵子是处于第二次减数分裂之中期,含有组织严密之减数分裂纺缍体,而染色体排列于中间之平面。此纺缍体在受精时卵子完成第二次减数分裂,排出第二极体有很重要之角色。卵子冷冻及解冻会造成纺缍体之伤害,幸而放回培养箱后会慢慢回复正常。我们曾应用老鼠卵子做研究,发现在解冻后两小时或三小时纺缍体正常者,较解冻后一小时高,受精率及胚胎成长能力也较好。卵子解冻后受精的结果和纺缍体之恢复与否有密切之关系,如果纺缍体未恢复,则会造成异常受精,第二极体不能排出,形成多核受精,或造成染色体数目异常,也会造成胚胎进一步分裂能力受阻。因此解冻后在保温箱培养一段时间,让纺缍体恢复再做受精,可提高正常受精及胚胎分裂能力。根据前面之研究,我们建议解冻之人类卵子,培养三小时,再进行受精。Rienzi等人使用Polscope观察解冻后之人类卵子,发现刚解冻时纺缍体未能观察到,而于培养箱三小时后则可观察到,和我们的老鼠实验有相近之发现。   但如果解冻太久才做受精,也必须考虑卵子老化之问题。当一个新鲜的卵子取出后,其最适当的受精时间,根据Dozortsev等人之研究为hCG注射后37-41小时。因此做卵子冷冻的治疗时须同时考虑两个因素,包括卵子代谢老化及纺缍体的问题。我们建议在hCG注射后34小时取卵,36小时冷冻,脱水冷冻过程约于30分钟时,温度会下降至零度以下,此时应属代谢停止状态。然后继续降温、保存于液态氮桶内。   解冻时之步骤于室温状态约30分钟,放回保温箱三小时让纺缍体回复,再进行受精。因此把整个过程的时间总合起来,约于hCG注射后40小时进行受精,依此原则去做可兼顾卵子代谢老化及纺缍体的因素。   经过三年左右之动物实验后,自2001年九月,台大医院人工生殖研究室开始实施人类卵子冷冻保存的计画,采用Fabbri等人发展的0。3 M蔗糖浓度慢速冷冻方式,我们选择于解冻后三小时实施精虫显微注射,以期让纺锤体有时间恢复正常。卵子存活率为75%,正常受精率67%,分裂率91%。有27名患者冷冻保存的卵子已经解冻, 9名怀孕(33%),8名成功怀孕(31%),1名流产(11%)。   2004年起,美国纽约大学Noyes 等人比较Fabbri慢速冷冻及玻璃化冷冻,他们是用麦管做玻璃化冷冻,于解冻后三小时后以精子显微注射受精,发现其存活率为86% vs。 83%;受精率为76% vs。 62%,分裂率为97% vs。 48%,桑椹期/囊胚期比率为66% vs。 43%。由此初步结果看来,用麦管做玻璃化冷冻之受精率及分裂率较慢速冷冻差,在混合植入5个周期中,着床率28%,3位怀孕、2位(40%)继续怀孕。   义大利Antinori 等人使用15%EG, 15%DMSO, plus 0。5 M sucrose 及Cryotop 做玻璃化冷冻,于解冻后两小时做精子注射,共解冻35个卵子,其存活率为91%、受精率为93%、分裂率为90%、怀孕率38% (5/13)。由此看来玻璃化冷冻亦有长足之进步与改进空间。   有学者发现哺乳类卵子冷冻保存时会使皮质颗粒(cortical granule) 提早释出,造成透明带硬化,进而影响精子的进入及受精。但是也有学者认为冷冻过程并不会使皮质颗粒提早释出。Kazem等人发现精虫显微注射应用于冷冻卵子,其受精率比一般的体外受精还要高;但是Gook等人的报告则是两者受精率差不多。即便如此,近年来精虫显微注射还是广泛应用于冷冻卵子。研究人类卵子使用Fabbri慢速冷冻之方法,解冻后做皮质颗粒检查,发现并无明显之变化,而在临床上亦发现使用精虫显微注射与传统体外受精之受精率与分裂率并无明显之差别,然目前数目并不多,仍须更多之研究来厘清精虫显微注射是否为必要角色。
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